Trong các quy trình điều trị tế bào và sản xuất tế bào ex vivo, việc sử dụng các vật liệu hỗ trợ (ancillary materials) đạt chuẩn GMP là điều kiện tiên quyết để đảm bảo an toàn, hiệu quả và tuân thủ quy định.
Cell-Vive™ GMP Cell Activation and Expansion Tools từ BioLegend chính là giải pháp tối ưu dành cho bạn.
Tuân Thủ Tiêu Chuẩn Chất Lượng Quốc Tế:
Các sản phẩm Cell-Vive™ GMP được sản xuất và kiểm định nghiêm ngặt theo:
- USP <1043> – Vật liệu hỗ trợ cho sản phẩm tế bào, gen và mô.
- Ph. Eur. 5.2.12 – Hướng dẫn cho vật liệu phụ trong sản xuất sinh học
- Cơ sở sản xuất đạt chứng nhận ISO 13485:2016 – tiêu chuẩn chất lượng cho thiết bị và vật liệu y tế.
Đặc Điểm và Quy Trình Sản Xuất Nổi Bật:
- Hàm lượng endotoxin thấp.
- Không chứa huyết thanh và thành phần từ động vật.
- Kiểm tra vi sinh vật, nhiễm Mycoplasma và tính năng hoạt động.
- Đảm bảo tính nhất quán giữa các lô sản xuất.
- Theo dõi truy xuất nguyên liệu và hồ sơ đầy đủ
- Quy trình đào tạo nhân sự và giám sát thiết bị chặt chẽ.
- Cung cấp Certificate of Analysis (CoA) cho từng lô sản phẩm.
- Đánh giá chất lượng theo ISO và kiểm duyệt QA trước khi xuất xưởng.
Kích Hoạt Tế Bào T – Cell-Vive™ GMP CD3/CD28 Human T Cell Activation Beads:
Cell-Vive™ CD3/CD28 Beads cung cấp tín hiệu kích hoạt chính (anti-CD3) và đồng kích thích (anti-CD28) để thúc đẩy quá trình kích hoạt và nhân rộng tế bào T người một cách hiệu quả mà không cần tế bào trình diện kháng nguyên (APC) hay feeder cells.
Các ứng dụng hạ nguồn bao gồm việc sử dụng trong quy trình sản xuất tế bào ex vivo:
Đây là tổng quan về quy trình: Sau khi rửa hạt bead, chỉ cần thêm trực tiếp các hạt này vào tế bào T đã được phân lập hoặc PBMC theo tỷ lệ 1:1 giữa bead và tế bào để kích hoạt mạnh mẽ tế bào T. Tiếp theo, ủ tế bào trong tủ ấm CO₂ có độ ẩm để đảm bảo quá trình kích thích và tăng sinh tế bào T diễn ra chính xác. Các hạt bead được phủ kháng thể có thể được loại bỏ khỏi tế bào bằng nam châm tách từ.
Sản phẩm này đã được tối ưu hóa trên tế bào T CD3+ phân lập và PBMCs. Các nguồn tế bào T khác có thể cần điều chỉnh quy trình cho phù hợp.
Tế bào đơn nhân từ máu ngoại vi người (PBMCs) được phân lập từ máu toàn phần và gieo vào đĩa với mật độ 5 x 10⁵ tế bào/giếng trong môi trường nuôi cấy IMDM hoàn chỉnh, có bổ sung 5% huyết thanh AB người và 30 IU/mL interleukin-2 tái tổ hợp người.
Tham khảo sản phẩm tại: https://www.biolegend.com/en-us/products/recombinant-human-il-2-e-coli-expressed-carrier-free-19573
Vào ngày 0, các tế bào được chia làm nhóm không kích thích hoặc được ủ với các hạt kích hoạt theo tỷ lệ 1:1 (bead:tế bào) gồm:
- Cell-Vive™ GMP CD3/CD28 Human T Cell Activation Beads
Tham khảo sản phẩm thêm tại: https://www.biolegend.com/en-us/products/cell-vive-gmp-cd3-cd28-human-t-cell-activation-beads-25529
- RUO Human CD3/CD28 T Cell Activation Beads
Tham khảo sản phẩm thêm tại: https://www.biolegend.com/en-us/products/human-cd3-cd28-t-cell-activation-beads-23351
- Hạt kích hoạt CD3/CD28 của hãng khác.
Các tế bào được nuôi ở 37°C, 5% CO₂ trong vòng 11 ngày và được bổ sung môi trường tươi mỗi 2–4 ngày.
Số lượng tế bào tổng và mức độ tăng sinh (fold expansion) được đo tại các thời điểm được chỉ định.
Các tế bào đơn nhân từ máu ngoại vi người (PBMCs) được phân lập từ máu toàn phần và gieo vào đĩa nuôi cấy với mật độ 5 x 10⁵ tế bào/giếng trong môi trường IMDM hoàn chỉnh, có bổ sung 5% huyết thanh AB người và 30 IU/mL interleukin-2 tái tổ hợp người.
Vào ngày 0, các tế bào được chia thành các nhóm:
- Không kích thích.
- Kích thích bằng hạt Cell-Vive™ GMP CD3/CD28 Human T Cell Activation Beads
- Kích thích bằng hạt RUO Human CD3/CD28 T Cell Activation Beads.
- Kích thích bằng hạt CD3/CD28 từ hãng đối chứng.
Tế bào được nuôi trong điều kiện 37°C, 5% CO₂ trong 11 ngày và được bổ sung môi trường tươi mỗi 2–4 ngày để hỗ trợ tăng sinh.
Tại các thời điểm được chỉ định, tế bào được thu thập và nhuộm bề mặt với các kháng thể sau:
- APC anti-human CD3 (clone UCHT1)
Tham khảo sản phẩm tại: https://www.biolegend.com/en-us/products/apc-anti-human-cd3-antibody-861
- PE anti-human CD4 (clone RPA-T4)
Tham khảo sản phẩm tại: https://www.biolegend.com/en-us/products/pe-anti-human-cd4-antibody-827
- FITC anti-human CD8 (clone SK1)
Tham khảo sản phẩm tại: https://www.biolegend.com/en-us/products/fitc-anti-human-cd8-antibody-6149
- PE/Cyanine7 anti-human PD1 (clone A17188B)
Tham khảo sản phẩm tại: https://www.biolegend.com/en-us/products/pe-cyanine7-anti-human-cd279-antibody-19050
- APC/Fire™ 750 anti-human CD69 (clone FN50)
Tham khảo sản phẩm tại: https://www.biolegend.com/en-us/products/apc-fire-750-anti-human-cd69-antibody-13233
- 7-AAD (thuốc nhuộm khả năng sống)
Tham khảo sản phẩm tại: https://www.biolegend.com/en-us/products/7-aad-viability-staining-solution-1649
Kích Hoạt Tế Bào NK – Cell-Vive™ GMP NKp46/CD2 Human NK Cell Activation Beads:
Cell-Vive™ GMP NKp46/CD2 Beads là giải pháp lý tưởng giúp kích hoạt tế bào NK người một cách hiệu quả trong các ứng dụng in vitro hoặc ex vivo, thông qua hạt siêu từ tính được phủ kháng thể NKp46 và CD2.
- Không cần sử dụng tế bào trình diện kháng nguyên (APCs)
- Không cần tế bào nuôi đồng (feeder cells)
Ứng dụng Downstream:
Các hạt kích hoạt NK này có thể được ứng dụng trong nhiều nghiên cứu và quy trình sản xuất tiên tiến như:
- Thử nghiệm chức năng (Functional assays)
- Phân tích biểu hiện gen (Gene expression analysis)
- Xác định đặc điểm miễn dịch (Phenotypic characterization)
- Sản xuất tế bào NK phục vụ điều trị ex vivo.
- Các tế bào đơn nhân từ máu ngoại vi người (PBMCs) được kích thích bằng Cell-Vive™ GMP NKp46/CD2 Human NK Cell Activation Beads hoặc sản phẩm tương đương từ hãng đối chứng, theo tỷ lệ 1:2 giữa bead và tế bào, trong thời gian 14 ngày.
- Tế bào được nuôi trong môi trường IMDM có bổ sung: 5% huyết thanh AB người; 100 IU/mL IL-2 tái tổ hợp người; 10 ng/mL IL-15 tái tổ hợp người.
- Vào ngày thứ 6 và thứ 9, tế bào được tách và tái gieo ở mật độ 1,0 x 10⁶ tế bào/mL.
- Đến ngày thứ 14, tế bào được thu hoạch để đánh giá mức độ tăng sinh tổng thể và đặc điểm miễn dịch học.
- : Mức độ tăng sinh gấp lần (fold expansion) của tế bào CD56⁺ được tính bằng cách so sánh phần trăm CD56⁺ (xác định bằng flow cytometry) và tổng số tế bào vào ngày 14 với phần trăm CD56⁺ ban đầu trong PBMCs ở ngày 0.
- (Phải): Tỷ lệ sống tế bào tổng thể vào ngày thứ 14.
Phân tích đặc điểm miễn dịch chuyên sâu tiếp theo được thực hiện trên các tế bào CD56⁺ vào ngày thứ 14, cho thấy sự khác biệt giữa tế bào được tạo ra bằng Cell-Vive™ GMP NKp46/CD2 Human NK Cell Activation Beads (màu hồng tím) và sản phẩm tương đương từ hãng đối chứng (màu xanh ngọc).
NGUỒN: BIOLEGEND :
